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       綠洲生化企業(yè)經(jīng)過二十年的不懈努力，為我國農(nóng)殘快速檢測(cè)作出了重要的貢獻(xiàn)。2001年農(nóng)業(yè)部發(fā)布了蔬菜上有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒快速檢測(cè)方法行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（NY/T 448-2001），接著衛(wèi)生部又頒布了蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速檢測(cè)國家標(biāo)準(zhǔn)方法（GB/T 5009.199-2003），這兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)都采用了基于昆蟲毒理學(xué)之膽堿酯酶抑制原理而建立起來的酶抑制率法（分光光度法），我們不但提供了成熟的技術(shù)和產(chǎn)品，而且積極參與了標(biāo)準(zhǔn)的制定工作。

 

       在一定條件下，有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對(duì)膽堿酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率與農(nóng)藥的濃度呈正相關(guān)。正常條件下，膽堿酯酶(ChE)催化神經(jīng)傳導(dǎo)代謝產(chǎn)物類似物（碘化硫代乙酰膽堿ATCI或碘化硫代丁酰膽堿BTCI）水解，其水解產(chǎn)物與顯色劑（二硫代二硝基苯甲酸DTNB）發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生黃色物質(zhì)，用分光光度計(jì)或農(nóng)殘測(cè)試儀在412nm處測(cè)定吸光度的變化值（△A），計(jì)算出抑制率可以判斷出樣品中是否有高劑量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的存在。

 

       對(duì)于酶抑制率法來說，膽堿酯酶制劑是最為關(guān)鍵的因素，其質(zhì)量技術(shù)水平?jīng)Q定了檢測(cè)的靈敏度、穩(wěn)定性和可靠性。膽堿酯酶制劑的研發(fā)工作一直是本公司的重點(diǎn)，我們研究了大量的酶源材料，在提取方法和保持酶活性穩(wěn)定技術(shù)等方面也積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)，是目前國內(nèi)唯一可以根據(jù)客戶需求，生產(chǎn)不同靈敏度和活性的液體酶制劑的生產(chǎn)廠家，產(chǎn)量和質(zhì)量都一直處于國內(nèi)領(lǐng)先水平，其中比較有代表性的產(chǎn)品如下：

 

緩 沖 劑       10包        每包加500mL蒸餾水或純凈水溶解         常溫存放

膽堿酯酶       10瓶        不用配制，直接取用                   4℃冰箱保存      每份加100μL

顯 色 劑       2瓶         加25mL緩沖液溶解          4℃冰箱保存      每份加100μL

底 物          4瓶         加12.5mL蒸餾水或純凈水溶解        4℃冰箱保存      每份加100μL

                   或者加2.5mL蒸餾水或純凈水溶解      4℃冰箱保存      每份加20μL

酶 活 力        空白對(duì)照1分鐘吸光度變化值(ΔΑ0）在0.15-0.3之間。

 

使用方法：請(qǐng)按照國家標(biāo)準(zhǔn)方法GB/T 5009.199-2003操作，或根據(jù)農(nóng)藥殘留測(cè)試儀的使用說明進(jìn)行測(cè)試。

 

取2g果蔬樣品（塊莖類取4g)，葉菜剪成1cm左右見方的碎片，塊莖類取橫截面樣品或取其表皮，放入三角瓶中，加入10mL緩沖液，振蕩1～2min ，倒出提取液，靜置2min，待測(cè)。若提取液混濁或雜質(zhì)太多可過濾后再測(cè)。

 

對(duì)照測(cè)試：于反應(yīng)瓶中加入2.5mL緩沖液，再分別加入100μL酶液和顯色劑，混勻，靜置反應(yīng)10min后加入100μL底物，搖勻并立即倒入比色杯中，及時(shí)放入儀器的測(cè)量室第1通道，合上蓋。按〈B〉鍵，顯示屏下方延遲10s后，測(cè)量時(shí)間開始倒計(jì)時(shí)180s，計(jì)時(shí)完畢，顯示屏顯示吸光度增量及抑制率。在進(jìn)行對(duì)照測(cè)試時(shí)，2～8通道可同時(shí)進(jìn)行樣品測(cè)試。

樣品測(cè)試：于反應(yīng)瓶中加入2.5mL待測(cè)液，再分別加入100μL酶液和顯色劑，混勻，靜置反應(yīng)10min后加入100μL底物，搖勻并立即倒入比色杯中，及時(shí)放入儀器的測(cè)量室通道，合上蓋。按〈M〉鍵，顯示屏下方延遲10s后，測(cè)量時(shí)間開始倒計(jì)時(shí)180s，計(jì)時(shí)完畢，顯示屏顯示吸光度增量及抑制率。數(shù)據(jù)自動(dòng)保存，如有需要按〈P〉鍵打印。

 

以分光光度計(jì)測(cè)試(412 nm波長)時(shí)，按下式計(jì)算抑制率：

                                                        抑制率(%)=[(ΔΑ0－ΔΑt )/ΔΑ0]×100

以農(nóng)藥殘留快速測(cè)試儀檢測(cè)時(shí)其抑制率一般可自動(dòng)計(jì)算。若樣品抑制率≥50%，表示樣品農(nóng)殘超標(biāo)，為陽性結(jié)果。陽性結(jié)果的樣品需做2次以上重復(fù)檢測(cè)，多次檢測(cè)仍呈陽性需用氣相色譜等儀器做進(jìn)一步確認(rèn)。

 

由于采用的標(biāo)準(zhǔn)方法的不同，取樣量、檢測(cè)程序和判定標(biāo)準(zhǔn)也有所不同，如國標(biāo)法以抑制率≥50%判定為陽性，而農(nóng)業(yè)部行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)則以抑制率≥70%判定為陽性。我們進(jìn)行了大量的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)在實(shí)際檢測(cè)中，兩種方法的最終檢測(cè)靈敏度還是基本一致的。我們用農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)液對(duì)農(nóng)殘速測(cè)試劑的最低檢測(cè)限進(jìn)行了多次測(cè)試，并通過了中國廣州分析測(cè)試中心和農(nóng)業(yè)部蔬菜水果質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心(廣州)等專業(yè)檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)的檢測(cè)驗(yàn)證，結(jié)果如下：

 

 

 

 

本公司的農(nóng)殘速測(cè)試劑穩(wěn)定性較好，可以常溫運(yùn)輸或郵寄，長期存放應(yīng)在4℃冰箱中，保質(zhì)期為12個(gè)月；室溫或常溫保存時(shí)，保質(zhì)期為3～6個(gè)月。

 

1、任何試劑使用時(shí)，用一瓶打開一瓶，用完后才使用新的，防止試劑變質(zhì)。

2、酶、底物和顯色劑碰到一起會(huì)馬上發(fā)生生化反應(yīng)，移液器和容器都應(yīng)各自貼上標(biāo)簽，單獨(dú)使用，以免交叉污染。

3、從任何試劑瓶吸出的試劑，禁止再次注射回試劑瓶。