在實(shí)驗(yàn)室工作中，驗(yàn)收新儀器或儀器使用一段時(shí)間后都要進(jìn)行波長(zhǎng)校正和吸光度校正。建議采用下述較為簡(jiǎn)便、實(shí)用的方法進(jìn)行校正。

鐠玻璃或鈥玻璃都有若干特征的吸收峰，可用來(lái)校正分光光磁力攪拌器度計(jì)的波長(zhǎng)標(biāo)尺，前者用于可見(jiàn)光區(qū)，后者對(duì)紫外和可見(jiàn)光區(qū)都適用。K2CrO4標(biāo)準(zhǔn)溶液用來(lái)校正吸光度標(biāo)度，即0.0400g K2CrO4溶解于1 L的0.05mol·L-1KOH溶液中制成標(biāo)準(zhǔn)溶液。于1cm光程的吸收池中，在25℃時(shí)用不同波長(zhǎng)測(cè)得的吸光度值見(jiàn)表4.1。

表4.1 鉻酸鉀溶液的吸光度

一、分光光度計(jì):又稱光譜儀(spECtrometer)，是將成分復(fù)雜的光，分解為光譜線的科學(xué)儀器。測(cè)量范圍一般包括波長(zhǎng)范圍為380~780nm的可見(jiàn)光區(qū)和波長(zhǎng)范圍為200～380nm的紫外光區(qū)。不同的光源都有其特有的發(fā)射光譜,因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源。鎢燈的發(fā)射光譜：鎢燈光源所發(fā)出的380～780nm波長(zhǎng)的光譜光通過(guò)三棱鏡折射后，可得到由紅、橙、黃、綠、藍(lán)、靛、紫組成的連續(xù)色譜；該色譜可作為可見(jiàn)光分光光度計(jì)的光源。原理：分光光度計(jì)采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長(zhǎng)的光源，通過(guò)系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長(zhǎng)的光源，光線透過(guò)測(cè)試的樣品后，部分光線被吸收，計(jì)算樣品的吸光值，從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。單色光輻射穿過(guò)被測(cè)物質(zhì)溶液時(shí)，被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度（光路長(zhǎng)度）成正比，其關(guān)系如下式：A=-lg(I/I。)=-lgT=kLc式中:A為吸光度；I。為入射的單色光強(qiáng)度；I為透射的單色光強(qiáng)度光度計(jì)；T為物質(zhì)的透射率；k為摩爾吸收系數(shù)；L為被分析物質(zhì)的光程，即比色皿的邊長(zhǎng)；c為物質(zhì)的濃度；物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收波長(zhǎng)，以及相應(yīng)的吸收系數(shù)是該物質(zhì)的物理常數(shù)。當(dāng)已知某純物質(zhì)在一定條件下的吸收系數(shù)后可用同樣條件將該供試品配成溶液，測(cè)定其吸收度,即可由上式計(jì)算出供試品中該物質(zhì)的含量。在可見(jiàn)光區(qū)，除某些物質(zhì)對(duì)光有吸收外，很多物質(zhì)本身并沒(méi)有吸收但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過(guò)處理使其顯色后再測(cè)定,故又稱比色分析。由于顯色時(shí)影響呈色深淺的因素較多，且常使用單色光純度較差的儀器，故測(cè)定時(shí)應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌吠瑫r(shí)操作。