第一步，知道你所需要測(cè)量物質(zhì)的特征吸收波長(zhǎng)是多少？這個(gè)可以在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或其他相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)或方法。例如測(cè)量總氮的話，就需要220和275nm這2個(gè)波長(zhǎng)，所以必須買紫外的光度計(jì)，并且最好帶雙波長(zhǎng)測(cè)定功能，例如測(cè)總磷是697nm，只需買臺(tái)可見(jiàn)光度計(jì)就可以了。
第二步，知道所測(cè)量的物質(zhì)的實(shí)驗(yàn)方法，需要哪些儀器和設(shè)備，還有玻璃器皿等，同時(shí)還有比較完成測(cè)量所需要的所有化學(xué)試劑等。這個(gè)可以在標(biāo)準(zhǔn)或?qū)嶒?yàn)方法中找到，基本在互聯(lián)網(wǎng)上都可以找到電子版的測(cè)量方法。
第三步，配置好所需測(cè)量物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)濃度溶液，一般是5-8個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度建議從高到低，建議每個(gè)不同濃度貼上標(biāo)簽，以防順序搞錯(cuò)。注意，部分實(shí)驗(yàn)需要往標(biāo)準(zhǔn)溶液中加顯色劑之后才可以用光度計(jì)進(jìn)行測(cè)量。
第四步，設(shè)置好光度計(jì)的測(cè)量波長(zhǎng)，這就需要熟悉光度計(jì)的基本操作，一般測(cè)量物質(zhì)的濃度都是用的標(biāo)準(zhǔn)曲線法，就是對(duì)應(yīng)光度計(jì)中的定量測(cè)量功能。具體操作時(shí)第一步，把儀器的波長(zhǎng)調(diào)整到我們所需要的波長(zhǎng)，例如測(cè)量總磷直接把波長(zhǎng)走到697nm，之后放入裝好蒸餾水的比色皿到樣品室做空白，就是熟稱的調(diào)零。第三部把標(biāo)準(zhǔn)溶液放入樣品室，依次測(cè)量他們的吸光度，儀器一般會(huì)自動(dòng)記錄之后就會(huì)給出標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，實(shí)驗(yàn)完畢。如果儀器不能直接記錄吸光度，可以先記在筆記本上，之后用excel軟件進(jìn)行計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線。判斷做出的標(biāo)準(zhǔn)曲線是否能用，看哪個(gè)R值即那個(gè)相關(guān)系數(shù)，一般最少做出0.999就可以用了，差一點(diǎn)的儀器也可以做出0.99.
第五步，把未知樣品放入樣品室就可以直接測(cè)量出樣品濃度。不知道你舊測(cè)什么樣的樣品？不同的樣品會(huì)有不的方法

用分光光度計(jì)測(cè)定質(zhì)粒DNA的濃度

一、目的
熟練掌握分光光度法檢測(cè)DNA純度和濃度的方法。
二、原理
DNA或RNA鏈上堿基的苯環(huán)結(jié)構(gòu)在紫光區(qū)具有較強(qiáng)吸收，其吸收峰在260nm處。波長(zhǎng)為260nm時(shí)，DNA或RNA的光密度OD260不僅與總含量有關(guān)，也隨構(gòu)型而有差異。對(duì)標(biāo)準(zhǔn)樣品來(lái)說(shuō)，濃度為1μg / ml時(shí)，DNA鈉鹽的OD260＝0.02當(dāng)OD260＝1時(shí)，
dsDNA濃度約為50μg / ml
ssDNA濃度約為37μg / ml
RNA濃度約為40μg / ml
寡核苷酸濃度約為30μg / ml（youyu底物不同有差異）

當(dāng)DNA樣品中含有蛋白質(zhì)、酚或其他小分子污染物時(shí)，會(huì)影響DNA吸光度的準(zhǔn)確測(cè)定。一般情況下同時(shí)檢測(cè)同一樣品的OD260、OD280和OD230，計(jì)算其比值來(lái)衡量樣品的純度。
經(jīng)驗(yàn)值：
純DNA：OD260/OD280≈1.8(＞1.9,表明有RNA污染；＜1。6，表明有蛋白質(zhì)、酚等污染）
純RNA：1.7 ＜OD260/OD280＜2.0（＜1.7時(shí)表明有蛋白質(zhì)或酚污染；＞2.0時(shí)表明可能有異硫氰酸殘存）
若樣品不純，則比值發(fā)生變化，此時(shí)無(wú)法用分光光度法對(duì)核酸進(jìn)行定量，可使用方案二的方法或其他方法進(jìn)行估算。
三、材料、試劑及器具
1、 材料
提取的PUC19樣品、PUC19標(biāo)準(zhǔn)樣品
2、 試劑
滅菌重蒸水，TE緩沖液
3、 器皿
石英比色皿；UV-240紫外分光光度計(jì)

四、操作步驟
1、 UV-240紫外分光光度計(jì)開(kāi)機(jī)預(yù)熱10min.
2、 用重蒸水洗滌比色皿，吸水紙吸干，加入TE緩沖液后，放入樣品室的S池架上，關(guān)上蓋板。
3、 設(shè)定狹縫后校零。
4、 將標(biāo)準(zhǔn)樣品和待測(cè)樣品適當(dāng)稀釋（DNA5μl或RNA4μl用TE緩沖液稀釋至1000μl）后，記
錄編號(hào)和稀釋度。
5、 把裝有標(biāo)準(zhǔn)樣品或待測(cè)樣品的比色皿放進(jìn)樣品室的S架上，關(guān)閉蓋板。
6、 設(shè)定紫外光波長(zhǎng)，分別測(cè)定230nm、260nm、280nm波長(zhǎng)時(shí)的OD值。
7、 計(jì)算待測(cè)樣品的濃度微電腦總硬度(CaCO 3)濃度測(cè)定儀與純度。
DNA樣品的濃度（μg / μl）:OD260×稀釋倍數(shù)×50/1000
RNA樣品的濃度（μg / μl）：OD260×稀釋倍數(shù)×40/1000

752型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)
操作規(guī)程

目的：建立紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)操作規(guī)程，確保其使用安全、正確。
范圍：適用于752型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)。
操作規(guī)程：
1. 打開(kāi)儀器開(kāi)關(guān)，儀器使用前應(yīng)預(yù)熱30分鐘。
2. 轉(zhuǎn)動(dòng)波長(zhǎng)旋鈕，觀察波長(zhǎng)顯示窗，調(diào)整至需要的測(cè)量波長(zhǎng)。
3. 根據(jù)測(cè)量波長(zhǎng)，撥動(dòng)光源切換桿，手動(dòng)切換光源。200-339nm使用氘燈，切換桿撥至紫外區(qū)；340nm-1000nm使用鹵鎢燈，切換桿撥至可見(jiàn)區(qū)。
4. 調(diào)T零
在透視比（T）模式，將遮光體放入樣品架，合上樣品室蓋，拉動(dòng)樣品架拉桿使其進(jìn)入光路。按下“調(diào)0%”鍵，屏幕上顯示“000.0”或“-000.0”時(shí)，調(diào)T零完成。
5.調(diào)100%T/ OA
先用參比（空白）溶液蕩洗比色皿2-3次，將參比（空白）溶液倒入比色皿，溶液量約為比色皿高度的3/4，用擦鏡紙將透光面擦拭干凈，按一定的方向，將比色皿放入樣品架。合上樣品室蓋，拉動(dòng)樣品架拉桿使其進(jìn)入光路。按下“調(diào)100%”鍵，屏幕上顯示“BL”延時(shí)數(shù)秒便出現(xiàn)“100.0”（T模式）或“000.0”、“-000.0”（A模式）。調(diào)100%T/ OA完成。
6.測(cè)量吸光度
6.1 參照操作步驟3、步驟4。
6.2 在吸光度（A）模式，參照步驟5調(diào)100%T/ OA。
6.3 用待測(cè)溶液蕩洗比色皿2-3次，將待測(cè)溶液倒入比色皿，溶液量約為比色皿 高度的3/4，用擦鏡紙將透光面擦拭干凈，按一定的方向，將比色皿放入樣品架。合上樣品室蓋，拉動(dòng)樣品架拉桿使其進(jìn)入光路，讀取測(cè)量數(shù)據(jù)。
7.測(cè)量透視比
7.1 參照操作步驟3、步驟4。
7.2 在透視比（T）模式，參照步驟5調(diào)100%T/ OA。
7.3用待測(cè)溶液蕩洗比色皿2-3次，將待測(cè)溶液倒入比色皿，溶液量約為比色皿 高度的3/4，用擦鏡紙將透光面擦拭干凈，按一定的方向，將比色皿放入樣品架。合上樣品室蓋，拉動(dòng)樣品架拉桿使其進(jìn)入光路，讀取測(cè)量數(shù)據(jù)。
8.濃度測(cè)量
8.1 參照操作步驟3、步驟4。
8.2 在透視比（T）模式，參照步驟5調(diào)100%T/ OA。
8.3用標(biāo)準(zhǔn)濃度溶液蕩洗比色皿2-3次，將標(biāo)準(zhǔn)濃度溶液倒入比色皿，溶液量約為比色皿高度的3/4，用擦鏡紙將透光面擦拭干凈，按一定的方向，將比色皿放入樣品架。合上樣品室蓋，拉動(dòng)樣品架拉桿使其進(jìn)入光路。
8.4 按下“功能鍵”切換至濃度（C）模式。
8.5 按下“▲”或“▼”鍵，設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，并按下“確認(rèn)”鍵。
8.6 用待測(cè)溶液蕩洗比色皿2-3次，將待測(cè)溶液倒入比色皿，溶液量約為比色皿 高度的3/4，用擦鏡紙將透光面擦拭干凈，按一定的方向，將比色皿放入樣品架。合上樣品室蓋，拉動(dòng)樣品架拉桿使其進(jìn)入光路，讀取測(cè)量數(shù)據(jù)。
9.斜率測(cè)量
9.1 參照操作步驟3、步驟4。
9.2 在透視比（T）模式，參照步驟5調(diào)100%T/ OA。
9.3 按下“功能鍵”切換至斜率（F）模式。
9.4 按下“▲”或“▼”鍵，設(shè)置樣品斜率。
9.5 用待測(cè)溶液蕩洗比色皿2-3次，將待測(cè)溶液倒入比色皿，溶液量約為比色皿 高度的3/4，用擦鏡紙將透光面擦拭干凈，按一定的方向，將比色皿放入樣品架。合上樣品室蓋，拉動(dòng)樣品架拉桿使其進(jìn)入光路，按下“確認(rèn)”鍵（此時(shí)儀器自動(dòng)切換至濃度（C）模式），讀取測(cè)量數(shù)據(jù)。
10. 測(cè)量完畢
10.1 測(cè)量完畢后，清理樣品室，將比色皿清洗干凈，倒置晾干后收起。
10.2 關(guān)閉電源，蓋好防塵罩，結(jié)束試驗(yàn)。

注意事項(xiàng)：
1、調(diào)100%T/ OA后，儀器應(yīng)穩(wěn)定5分鐘再進(jìn)行測(cè)量。
2、光源選擇不正確或光源切換桿不到位，將直接影響儀器的穩(wěn)定性。
3、比色皿應(yīng)配對(duì)使用，不得混用。置入樣品架時(shí)，石英比色皿上端的“Q”標(biāo)記（或箭頭）、玻璃比色皿上端的“G”標(biāo)記方向應(yīng)一致。
4、玻璃比色皿適用范圍：320nm~1100nm，石英比色皿適用范圍：200nm~1100nm。不知道你舊測(cè)什么樣的樣品？不同的樣品會(huì)有不的方法用分光光度計(jì)測(cè)定質(zhì)粒DNA的濃度一、目的熟練掌握分光光度法檢測(cè)DNA純度和濃度的方法。二、原理DNA或RNA鏈上堿基的苯環(huán)結(jié)構(gòu)在紫光區(qū)具有較強(qiáng)吸收，其吸收峰在260nm處。波長(zhǎng)為260nm時(shí)，DNA或RNA的光密度OD260不僅與總含量有關(guān)，也隨構(gòu)型而有差異。對(duì)標(biāo)準(zhǔn)樣品來(lái)說(shuō)，濃度為1μg / ml時(shí)，DNA鈉鹽的OD260＝0.02當(dāng)OD260＝1時(shí)， dsDNA濃度約為50μg / ml ssDNA濃度約為37μg / ml RNA濃度約為40μg / ml 寡核苷酸濃度約為30μg / ml（youyu底物不同有差異）當(dāng)DNA樣品中含有蛋白質(zhì)、酚或其他小分子污染物時(shí)，會(huì)影響DNA吸光度的準(zhǔn)確測(cè)定。一般情況下同時(shí)檢測(cè)同一樣品的OD260、OD280和OD230，計(jì)算其比值來(lái)衡量樣品的純度。經(jīng)驗(yàn)值：純DNA：OD260/OD280≈1.8(＞1.9,表明有RNA污染；＜1。6，表明有蛋白質(zhì)、酚等污染） 純RNA：1.7 ＜OD260/OD280＜2.0（＜1.7時(shí)表明有蛋白質(zhì)或酚污染；＞2.0時(shí)表明可能有異硫氰酸殘存）若樣品不純，則比值發(fā)生變化，此時(shí)無(wú)法用分光光度法對(duì)核酸進(jìn)行定量，可使用方案二的方法或其他方法進(jìn)行估算。 三、材料、試劑及器具1、 材料提取的PUC19樣品、PUC19標(biāo)準(zhǔn)樣品2、 試劑滅菌重蒸水，TE緩沖液3、 器皿石英比色皿；UV-240紫外分光光度計(jì)四、操作步驟1、 UV-240紫外分光光度計(jì)開(kāi)機(jī)預(yù)熱10min.2、 用重蒸水洗滌比色皿，吸水紙吸干，加入TE緩沖液后，放入樣品室的S池架上，關(guān)上蓋板。3、 設(shè)定狹縫后校零。4、 將標(biāo)準(zhǔn)樣品和待測(cè)樣品適當(dāng)稀釋（DNA5μl或RNA4μl用TE緩沖液稀釋至1000μl）后，記 錄編號(hào)和稀釋度。5、 把裝有標(biāo)準(zhǔn)樣品或待測(cè)樣品的比色皿放進(jìn)樣品室的S架上，關(guān)閉蓋板。6、 設(shè)定紫外光波長(zhǎng)，分別測(cè)定230nm、260nm、280nm波長(zhǎng)時(shí)的OD值。7、 計(jì)算待測(cè)樣品的濃度與純度。DNA樣品的濃度（μg / μl）:OD260×稀釋倍數(shù)×50/1000RNA樣品的濃度（μg / μl）：OD260×稀釋倍數(shù)×40/1000 752型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)操作規(guī)程目的：建立紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)操作規(guī)程，確保其使用安全、正確。范圍：適用于752型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)。操作規(guī)程：1. 打開(kāi)儀器開(kāi)關(guān)，儀器使用前應(yīng)預(yù)熱30分鐘。2. 轉(zhuǎn)動(dòng)波長(zhǎng)旋鈕，觀察波長(zhǎng)顯示窗，調(diào)整至需要的測(cè)量波長(zhǎng)。3. 根據(jù)測(cè)量波長(zhǎng)，撥動(dòng)光源切換桿，手動(dòng)切換光源。200-339nm使用氘燈，切換桿撥至紫外區(qū)；340nm-1000nm使用鹵鎢燈，切換桿撥至可見(jiàn)區(qū)。4. 調(diào)T零在透視比（T）模式，將遮光體放入樣品架，合上樣品室蓋，拉動(dòng)樣品架拉桿使其進(jìn)入光路。按下“調(diào)0%”鍵，屏幕上顯示“000.0”或“-000.0”時(shí)，調(diào)T零完成。5.調(diào)100%T/ OA先用參比（空白）溶液蕩洗比色皿2-3次，將參比（空白）溶液倒入比色皿，溶液量約為比色皿高度的3/4，用擦鏡紙將透光面擦拭干凈，按一定的方向，將比色皿放入樣品架。合上樣品室蓋，拉動(dòng)樣品架拉桿使其進(jìn)入光路。按下“調(diào)100%”鍵，屏幕上顯示“BL”延時(shí)數(shù)秒便出現(xiàn)“100.0”（T模式）或“000.0”、“-000.0”（A模式）。調(diào)100%T/ OA完成。6.測(cè)量吸光度6.1 參照操作步驟3、步驟4。6.2 在吸光度（A）模式，參照步驟5調(diào)100%T/ OA。6.3 用待測(cè)溶液蕩洗比色皿2-3次，將待測(cè)溶液倒入比色皿，溶液量約為比色皿 高度的3/4，用擦鏡紙將透光面擦拭干凈，按一定的方向，將比色皿放入樣品架。合上樣品室蓋，拉動(dòng)樣品架拉桿使其進(jìn)入光路，讀取測(cè)量數(shù)據(jù)。7.測(cè)量透視比7.1 參照操作步驟3、步驟4。7.2 在透視比（T）模式，參照步驟5調(diào)100%T/ OA。7.3用待測(cè)溶液蕩洗比色皿2-3次，將待測(cè)溶液倒入比色皿，溶液量約為比色皿 高度的3/4，用擦鏡紙將透光面擦拭干凈，按一定的方向，將比色皿放入樣品架。合上樣品室蓋，拉動(dòng)樣品架拉桿使其進(jìn)入光路，讀取測(cè)量數(shù)據(jù)。8.濃度測(cè)量8.1 參照操作步驟3、步驟4。8.2 在透視比（T）模式，參照步驟5調(diào)100%T/ OA。8.3用標(biāo)準(zhǔn)濃度溶液蕩洗比色皿2-3次，將標(biāo)準(zhǔn)濃度溶液倒入比色皿，溶液量約為比色皿高度的3/4，用擦鏡紙將透光面擦拭干凈，按一定的方向，將比色皿放入樣品架。合上樣品室蓋，拉動(dòng)樣品架拉桿使其進(jìn)入光路。8.4 按下“功能鍵”切換至濃度（C）模式。8.5 按下“▲”或“▼”鍵，設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，并按下“確認(rèn)”鍵。8.6 用待測(cè)溶液蕩洗比色皿2-3次，將待測(cè)溶液倒入比色皿，溶液量約為比色皿 高度的3/4，用擦鏡紙將透光面擦拭干凈，按一定的方向，將比色皿放入樣品架。合上樣品室蓋，拉動(dòng)樣品架拉桿使其進(jìn)入光路，讀取測(cè)量數(shù)據(jù)。9.斜率測(cè)量9.1 參照操作步驟3、步驟4。9.2 在透視比（T）模式，參照步驟5調(diào)100%T/ OA。9.3 按下“功能鍵”切換至斜率（F）模式。9.4 按下“▲”或“▼”鍵，設(shè)置樣品斜率。9.5 用待測(cè)溶液蕩洗比色皿2-3次，將待測(cè)溶液倒入比色皿，溶液量約為比色皿 高度的3/4，用擦鏡紙將透光面擦拭干凈，按一定的方向，將比色皿放入樣品架。合上樣品室蓋，拉動(dòng)樣品架拉桿使其進(jìn)入光路，按下“確認(rèn)”鍵（此時(shí)儀器自動(dòng)切換至濃度（C）模式），讀取測(cè)量數(shù)據(jù)。10. 測(cè)量完畢10.1 測(cè)量完畢后，清理樣品室，將比色皿清洗干凈，倒置晾干后收起。10.2 關(guān)閉電源，蓋好防塵罩，結(jié)束試驗(yàn)。注意事項(xiàng)：1、調(diào)100%T/ OA后，儀器應(yīng)穩(wěn)定5分鐘再進(jìn)行測(cè)量。2、光源選擇不正確或光源切換桿不到位，將直接影響儀器的穩(wěn)定性。3、比色皿應(yīng)配對(duì)使用，不得混用。置入樣品架時(shí)，石英比色皿上端的“Q”標(biāo)記（或箭頭）、玻璃比色皿上端的“G”標(biāo)記方向應(yīng)一致。4、玻璃比色皿適用范圍：320nm~1100nm，石英比色皿適用范圍：200nm~1100nm。