【概要】

黃曲霉毒素是曲霉菌屬的黃曲霉和寄生曲霉的二次代謝產(chǎn)物，是自然界最危險(xiǎn)的致癌物質(zhì)之一，廣泛存在于谷物、堅(jiān)果、棉籽以及以此為原料生產(chǎn)的各種食品、油料、酒類、飼料中，并能通過動(dòng)物體產(chǎn)生同樣有害的代謝產(chǎn)物，存在于牛奶及奶制品，肉類甚至人體血液，組織中。

黃曲霉毒素中毒性最強(qiáng)的是黃曲霉毒素B1，是世界衛(wèi)生組織規(guī)定的I類致癌物質(zhì)，毒性是砒霜的68倍，其幾乎一直和黃曲霉毒素B2、G1 和 G2共存，是肝癌的三大致病因素之首。世界大部分國(guó)家和地區(qū)都已對(duì)食品和飼料中的黃曲霉毒素最高允許水平作了規(guī)定，因此，準(zhǔn)確測(cè)定食品及飼料中的黃曲霉毒素含量對(duì)于食品安全監(jiān)控具有重要意義。

【適用范圍】

可定性、定量檢測(cè)玉米、大米、麥類、豆類、花生、飼料等樣本中的黃曲霉毒素B1。

【試驗(yàn)原理】

本試劑盒采用競(jìng)爭(zhēng)ELISA原理，在微孔板上預(yù)包被黃曲霉毒素B1抗原，加入樣本/黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)品溶液及辣根過氧化物酶標(biāo)記的黃曲霉毒素B1抗體。樣本或標(biāo)準(zhǔn)品溶液中的黃曲霉毒素B1與預(yù)包被在微孔板上的黃曲霉毒素B1抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合辣根過氧化物酶標(biāo)記的黃曲霉毒素B1抗體。未結(jié)合的酶標(biāo)抗體在洗滌時(shí)被除去。再加入TMB顯色液，讀取吸光值。樣本的吸光值與其所含殘留物黃曲霉毒素B1的含量成負(fù)相關(guān)。對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可得出相應(yīng)殘留物黃曲霉毒素B1的含量。

【試劑盒靈敏度】

   試劑盒靈敏度：0.5ppb

【交叉反應(yīng)率】

   結(jié)構(gòu)類似物                                                                交叉反應(yīng)率

  黃曲霉毒素B1   ……………………………………………………………  100%

  黃曲霉毒素B2   ……………………………………………………………   15%

  黃曲霉毒素G1   ……………………………………………………………   11%

  黃曲霉毒素G2   ……………………………………………………………    4%

  黃曲霉毒素M1  ……………………………………………………………  0.5%

【試劑盒組成】

1. 96孔板×1塊

2. 標(biāo)準(zhǔn)液×6瓶：（2ml/瓶）

    0ppb, 0.5ppb, 2ppb, 4ppb, 8ppb,16ppb

3. 酶標(biāo)物1瓶   ……………………………………………6ml

4. 顯色液1瓶   …………………………………………12ml

5. 終止液1瓶   …………………………………………10ml

6. 濃縮洗滌液 （10×）1瓶………………………… 50ml

7. 濃縮樣品稀釋液（10×）1瓶 ……………………50ml

【需要而未提供的設(shè)備及試劑】

設(shè)備：

┅┅微孔板酶標(biāo)儀450nm/630nm

┅┅振蕩器（可選）

┅┅粉碎機(jī)

┅┅離心機(jī)（可選）

┅┅天平：感量0.01g

┅┅微量移液器：?jiǎn)蔚?20μl～200μl、200μl～1000μl、八道300μl

試劑：

┅┅甲醇（分析純）

┅┅去離子水（或蒸餾水）

【試劑配制】

1. 樣品稀釋液：將濃縮樣品稀釋液用去離子水按1:9體積比進(jìn)行稀釋（1份濃縮樣品稀釋液+9份去離子水）。

2. 洗滌工作液：將濃縮洗滌液用去離子水按1:9體積比進(jìn)行稀釋（1份濃縮洗滌液+9份去離子水）。

3. 70%甲醇水：將甲醇用去離子水按70:30體積比進(jìn)行稀釋（7份無水甲醇+3份去離子水）。

【樣本前處理步驟】

花生醬、芝麻醬、蛋黃醬、面粉、餅干、蛋糕等食品，各種飼料及花生粕、豆粕、麥麩、DDGS等原料（稀釋倍數(shù)：5）

1. 取10g粉碎的樣品與50ml 70%甲醇水混合均勻（可根據(jù)提取容器，等比例適量調(diào)整樣品量和甲醇水的量）；

2. 高速均質(zhì)2min或振蕩提取5min；

3. 2000g離心5min或定性濾紙過濾；

4. 取100μl上清液待測(cè)。