【概要】

黃曲霉毒素是曲霉菌屬的黃曲霉和寄生曲霉的二次代謝產物，是自然界最危險的致癌物質之一，廣泛存在于谷物、堅果、棉籽以及以此為原料生產的各種食品、油料、酒類、飼料中，并能通過動物體產生同樣有害的代謝產物，存在于牛奶及奶制品，肉類甚至人體血液，組織中。

黃曲霉毒素中毒性最強的是黃曲霉毒素B1，是世界衛生組織規定的I類致癌物質，毒性是砒霜的68倍，其幾乎一直和黃曲霉毒素B2、G1 和 G2共存，是肝癌的三大致病因素之首。世界大部分國家和地區都已對食品和飼料中的黃曲霉毒素最高允許水平作了規定，因此，準確測定食品及飼料中的黃曲霉毒素含量對于食品安全監控具有重要意義。

【適用范圍】

可定性、定量檢測玉米、大米、麥類、豆類、花生、飼料等樣本中的黃曲霉毒素B1。

【試驗原理】

本試劑盒采用競爭ELISA原理，在微孔板上預包被黃曲霉毒素B1抗原，加入樣本/黃曲霉毒素B1標準品溶液及辣根過氧化物酶標記的黃曲霉毒素B1抗體。樣本或標準品溶液中的黃曲霉毒素B1與預包被在微孔板上的黃曲霉毒素B1抗原競爭結合辣根過氧化物酶標記的黃曲霉毒素B1抗體。未結合的酶標抗體在洗滌時被除去。再加入TMB顯色液，讀取吸光值。樣本的吸光值與其所含殘留物黃曲霉毒素B1的含量成負相關。對照標準曲線，即可得出相應殘留物黃曲霉毒素B1的含量。

【試劑盒靈敏度】

   試劑盒靈敏度：0.5ppb

【交叉反應率】

   結構類似物                                                                交叉反應率

  黃曲霉毒素B1   ……………………………………………………………  100%

  黃曲霉毒素B2   ……………………………………………………………   15%

  黃曲霉毒素G1   ……………………………………………………………   11%

  黃曲霉毒素G2   ……………………………………………………………    4%

  黃曲霉毒素M1  ……………………………………………………………  0.5%

【試劑盒組成】

1. 96孔板×1塊

2. 標準液×6瓶：（2ml/瓶）

    0ppb, 0.5ppb, 2ppb, 4ppb, 8ppb,16ppb

3. 酶標物1瓶   ……………………………………………6ml

4. 顯色液1瓶   …………………………………………12ml

5. 終止液1瓶   …………………………………………10ml

6. 濃縮洗滌液 （10×）1瓶………………………… 50ml

7. 濃縮樣品稀釋液（10×）1瓶 ……………………50ml

【需要而未提供的設備及試劑】

設備：

┅┅微孔板酶標儀450nm/630nm

┅┅振蕩器（可選）

┅┅粉碎機

┅┅離心機（可選）

┅┅天平：感量0.01g

┅┅微量移液器：單道 20μl～200μl、200μl～1000μl、八道300μl

試劑：

┅┅甲醇（分析純）

┅┅去離子水（或蒸餾水）

【試劑配制】

1. 樣品稀釋液：將濃縮樣品稀釋液用去離子水按1:9體積比進行稀釋（1份濃縮樣品稀釋液+9份去離子水）。

2. 洗滌工作液：將濃縮洗滌液用去離子水按1:9體積比進行稀釋（1份濃縮洗滌液+9份去離子水）。

3. 70%甲醇水：將甲醇用去離子水按70:30體積比進行稀釋（7份無水甲醇+3份去離子水）。

【樣本前處理步驟】

花生醬、芝麻醬、蛋黃醬、面粉、餅干、蛋糕等食品，各種飼料及花生粕、豆粕、麥麩、DDGS等原料（稀釋倍數：5）

1. 取10g粉碎的樣品與50ml 70%甲醇水混合均勻（可根據提取容器，等比例適量調整樣品量和甲醇水的量）；

2. 高速均質2min或振蕩提取5min；

3. 2000g離心5min或定性濾紙過濾；

4. 取100μl上清液待測。