1、試劑配制及保存
緩沖劑 20包 每包加1000mL蒸餾水或純凈水溶解 常溫存放。
顯色劑 2瓶 每瓶加25mL緩沖液溶解 4℃冰箱保存，每份加50μL。
底 物 5瓶 每瓶加10mL蒸餾水或純凈水溶解 4℃冰箱保存，每份加50μL。
膽堿酯酶 5瓶 不用配制，直接取用 4℃冰箱保存，每份加50μL。
酶活力 空白對(duì)照3分鐘吸光度變化值(ΔΑ0)在0.4-0.8之間。
2、樣品提取
取2g果蔬樣品（塊莖類(lèi)取4g）剪成1cm左右見(jiàn)方碎片，放入小燒杯（或取樣瓶）中；加入20mL緩沖液，振蕩1～2min，倒出提取液，靜置2min待測(cè)。
3、測(cè)試
對(duì)照測(cè)試：于專(zhuān)用反應(yīng)瓶中加入3mL緩沖液，再分別加入50μL顯色劑和酶液，混勻，37℃下放置30min后加入50μL底物，搖勻并立即倒入比色杯中，放入測(cè)試通道，按儀器“對(duì)照”鍵測(cè)試3min的吸光度變值ΔΑ0。
樣品測(cè)試：于專(zhuān)用反應(yīng)瓶中加入3mL待測(cè)樣品液，再分別加入50μL顯色劑和酶液，混勻，37℃下放置30 min后加入50μL底物，搖勻并立即倒入比色杯中，放入測(cè)試通道，按儀器“樣品”鍵，測(cè)試3min的吸光度變化值ΔΑt。
結(jié)果判定：
◇ 以分光光度計(jì)測(cè)試時(shí)，按以下表達(dá)式計(jì)算出抑制率： 抑制率(%)=[(ΔΑ0－ΔΑt)/ΔΑ0]×100
◇ 以農(nóng)殘檢測(cè)儀檢測(cè)時(shí)其抑制率一般可自動(dòng)計(jì)算。若樣品抑制率≥70%，表示被測(cè)果蔬農(nóng)殘超標(biāo)，為陽(yáng)性結(jié)果。陽(yáng)性結(jié)果的樣品需做2次以上重復(fù)檢測(cè)，多次檢測(cè)仍呈陽(yáng)性需用氣相色譜等儀器做進(jìn)一步確認(rèn)。
操作提示：
在加底物的環(huán)節(jié)中，可預(yù)先將底物加入比色杯，待靜置時(shí)間一到，馬上將反應(yīng)瓶中的反應(yīng)液倒入已經(jīng)加有底物的比色杯，并迅速放入測(cè)試通道進(jìn)行測(cè)試。這樣可以減少同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品時(shí)因加底物時(shí)間過(guò)長(zhǎng)而造成的誤差。
4、注意事項(xiàng)
酶活性要求：本試劑盒中酶試劑正常活性ΔΑ0=0.4～ 0.8，符合NY/T 448-2001方法的要求。
保存：試劑盒應(yīng)保存4℃冰箱，保質(zhì)期12個(gè)月。
使用：任何試劑使用時(shí)，用一瓶打開(kāi)一瓶，用完后才使用新的，防止變質(zhì)。
器具專(zhuān)用原則：任何用于移液的器具和容器都應(yīng)各自貼上標(biāo)簽，單獨(dú)使用，以免交叉污染。
試劑只出不入原則：測(cè)試時(shí)，從任何試劑瓶吸出的試劑，禁止再次注射回試劑瓶。
環(huán)境溫度對(duì)測(cè)試的影響：當(dāng)環(huán)境溫度過(guò)低時(shí)（一般低于20℃）,測(cè)試時(shí)需作必要保溫措施。
